过氧化氢酶活性测定 检验过氧化氢的实验方法是什么？
过氧化氢的检测方法 ， 步骤是：（１）制备纳米级硫化亚铁：先将硫酸亚铁铵溶解于通氮除氧二次水中 ， 再加入硫化物和表面活性剂的混合溶液 ， 在超声条件下混合 ， 反应结束后离心洗涤沉淀 ， 真空干燥 ， 即得到纳米级硫化亚铁样品过氧化氢酶活性测定；其中硫化物和表面活性剂剂的摩尔比为１∶１ ， 表面活性剂用量为０．０１４Ｍ；（２）检测准备：在玻碳电极上依次滴涂硫化亚铁纳米粒子的悬浊液和聚合物膜 ， 晾干 ， 老化；（３）过氧化氢的检测：在电解池里连续加入过氧化氢 ， 进行电化学检测 ， 记录其安培响应 ， 即得到检测结果 。
文章插图
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本发明用纳米级的硫化亚铁来代替ＨＲＰ检测过氧化氢 ， 由于纳米材料具有大的比表面积 ， 所以提高了检测的灵敏度 ， 并达到了简便、快速、灵敏、稳定的目的
方法一取少量样品放入干燥洁净的试管中,然后向试管中加入少量二氧化锰,如果有气泡产生并使带火星的木条复燃,则证明是过氧化氢.化学方程式为2H2O2=MnO2=2H2O+O2↑
方法二取少量酸性的硫酸亚铁溶液放入干燥洁净的试管中,然后向试管中加入少量样品,溶液的颜色由浅绿色变为黄色,则证明是过氧化氢.化学方程式为
2 FeSO4+ H2O2 + H2SO4= Fe2（SO4)3 + 2H2O
方法三取少量酸性高锰酸钾溶液放入干燥洁净的试管中,然后向试管中加入少量样品,溶液褪色,则证明是过氧化氢.化学方程式为
2 KMnO4 + 5 H2O2 + 3 H2SO4 = 2 MnSO4 + K2SO4 + 5 O2+ 8 H2O
【过氧化氢酶活性测定 检验过氧化氢的实验方法是什么？】解释：过氧化值表示油脂和脂肪酸等被氧化程度的一种指标 。是1千克样品中的活性氧含量 ， 以过氧化物的毫摩尔数表示 。用于说明样品是否因已被氧化而变质 。那些以油脂、脂肪为原料而制作的食品 ， 通过检测其过氧化值来判断其质量和变质程度 。测定方法：在中国食品质量标准GB/T 5009.37-2003食用油卫生标准分析方法中 ， 提及或介绍了对食用植物油中酸价、过氧化值、羟基价、游离棉酚（适用于棉籽油）、砷、苯并芘、黄曲霉毒素B1、残留溶剂、镍、非食用油、黄曲霉毒素的检测方法和标准 ， 其中涉及到过氧化值的主要有两种检测方法滴定法和比色法 。滴定法试剂1、饱和碘化钾溶液：称取14g碘化钾 ， 加10ml水溶解 ， 必要时微热加速溶解 ， 冷却后贮于棕色瓶中 。2、三氯甲烷—冰乙酸混合液：量取40ml三氯甲烷 ， 加60ml冰乙酸 ， 混匀 。3、0.02mol/L硫代硫酸钠标准溶液：称取5g硫代硫酸钠（Na2S2O3 ·5H2O）（或3g无水硫代硫酸钠） ， 溶于1000ml水中 ， 缓缓煮沸10分钟 ， 冷却 。放置两周后过滤备用 。4、10g/L 淀粉指示剂：称取可溶性淀粉0.50g ， 加入少许水调成糊状倒入50ml沸水中调匀 ， 煮沸 ， 临用时现配 。测定步骤精确称取2.00—3.00g混匀的样品 ， 置于250ml碘量瓶中 ， 加30ml三氯甲烷—冰乙酸混合液（因为纯品对光敏感 ， 遇光照会与空气中的氧作用 ， 逐渐分解而生成剧毒的光气(碳酰氯)和氯化氢 。可加入0.6%～1%的乙醇作稳定剂 。能与乙醇、苯、乙醚、石油醚、四氯化碳、二硫化碳和油类等混溶） ， 使样品完全溶解；加入1.00ml饱和碘化钾溶液 。紧密塞好瓶塞 ， 并轻轻振摇0.5min ， 然后在暗处放置5min ， 取出加100ml水 ， 摇匀 。立即用硫代硫酸钠标准溶液滴定 ， 至淡黄色时 ， 加1ml淀粉指示剂 ， 继续滴定至蓝色消失为终点 ， 取相同量三氯甲烷—冰乙酸混合液、碘化钾溶液、水 ， 按同一方法 ， 做试剂空白试验 。测定结果的计算与分析1、计算：X=[（V-V0）×N×0.1269]/m式中：X—样品的过氧化值 ， % 。V—样品消耗硫代硫酸钠溶液的体积 ， ml 。V0—空白消耗硫代硫酸钠溶液的体积 ， ml 。N—硫代硫酸钠标准溶液的麾尔浓度 ， mol/L 。0.1269—1N硫代硫酸钠1ml相当于碘的克数 。2、分析：油脂新鲜 ， 其过氧化值不应大于0.15% 。比色法原理：试样用三氯甲烷-甲醇混合溶剂溶解 ， 试样中的过氧化物将二价铁离子氧化成三价铁离子 ， 三价铁离子与硫氰酸盐反应生成橙红色硫氰酸铁配合物 ， 在波长500nm处测定吸光度 ， 与标准系列比较定量 。试剂：盐酸溶液、过氧化氢、三氯甲烷+甲醇混合溶剂、氯化亚铁溶液、硫氰酸钾溶液、铁标准储备溶液（1.0g/L）、铁标准使用溶液（0.01g/L） 。仪器：分光光度计 ， 10mL具塞玻璃比色管 。分析步骤试样溶液的制备：精密称取约0.01g~1.0g试样（准确至刻度0.0001g）于10mL容量瓶内 ， 加三氯甲烷+甲醇（7+3）混合溶剂溶解并稀释至刻度 ， 混匀 。分别精密吸取铁标准使用溶液（10ug/mL）0,0.2,0.5,1.0,2.0,3.0,4.0mL（各自相当于铁浓度0,2.0,5.0,10.0,20.0,30.0,40.0ug）于干燥的10mL比色管中 ， 用三氯甲烷+甲醇（7+3）混合溶剂稀释至刻度 ， 混匀 。加1滴（约0.05mL）硫氰酸钾溶液（300g/L） ， 混匀 。室温（10℃-35℃）下准确放置5min后 ， 移入25px比色皿中 ， 以三氯甲烷+甲醇（7+3）混合溶剂为参比 ， 于波长500nm处测定吸光度 ， 以标准各点吸光度减去零管吸光度后绘制标准曲线或计算直线回归方程 。试样测定：精密吸取1.0mL试样溶液于干燥的10mL比色管内 ， 加1滴（约0.05mL）氯化亚铁（3.5g/L）溶液 ， 用三氯甲烷+甲醇（7+3）混合溶剂稀释至刻度 ， 混匀 。以下按试样溶液制备中自“加1滴（约0.05mL）硫氰酸钾溶液（300g/L）……”起依法操作 。试样吸光度减去零管吸光度后与曲线比较或代入回归方程求得含量 。结果计算：试样中过氧化值的含量按右式进行计算 。式中：X——试样中过氧化值的含量 ， 单位为毫克当量每千克（meq/kg）C——由标准曲线上查得试样中的铁的质量 ， 单位为微克（ug）C0——由标准曲线上查得零管铁的质量 ， 单位为微克（ug）V1——试样稀释总体积 ， 单位为毫升（mL）V2——测定时取取样提及 ， 单位为毫升（mL）M——试样质量 ， 单位为克（g）55.84——Fe的原子量2——换算因子有研究认为 ， 测定食品中过氧化值的含量 ， 宜选择比色法。
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