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【植物】植物组织培养

植物 种植知识


植物组织培养【【植物】植物组织培养】一、原理

植物组织培养是指在无菌条件下 ， 对离体植物组织（器官或细胞）分离并在培养基中培养 ， 使其能够继续生长 ， 甚至分化发育成一完整的植株的一门实验技术 。 组织培养的理论依据是植物细胞的全能性 ， 即植物体的每个细胞携带着一套完整的基因组 ， 因此具有发育成完整植株的潜在能力 。 植物组织当中原本已经分化的细胞 ， 一旦脱离原有的机体环境 ， 成为离体状态 ， 在适宜的营养和外界条件下 ， 就会表现出全能性 ， 从已经分化定型的细胞 ， 脱分化 ， 成为恢复分裂能力的细胞 ， 并能重新生长发育成完整的植株 。

愈伤组织是指一个离体的细胞、一块组织或一个器官的细胞 ， 通过脱分化不断分裂、增生子细胞 ， 这些细胞胞分裂快 ， 结构疏松 ， 颜色浅而透明 ， 逐渐形成了无序结构的一团细胞 。

二、试剂及仪器

（一）仪器设备

超净工作台、高压灭菌锅、微波炉、人工气候箱、电子天平、移液器（1-5ml）、恒温磁力搅拌器、酸度计、手术刀、手术剪、称量纸、皮筋、封口膜、三角烧瓶（500ml、100ml）、量筒、烧杯（1000ml）、试剂瓶（1000ml、100ml）、长镊子、记号笔（或标签纸）、培养皿、酒精灯、打孔器

（二）试剂

75%酒精、次氯酸钠（或h2o2）、植物生长激素、蔗糖、脂粉、hcl、naoh、kh2po4、cocl2?6h2o、烟酸、盐酸-硫胺素（vb1）、盐酸-吡哆醇（vb6）、肌醇、甘氨酸

三、实验步骤

（一）培养基配制

1.培养基的选择

植物组织培养中应用的培养基 ， 一般由无机营养物、碳源、维生素、生长调节剂和有机附加物等五类物质组成 。

无机营养物包括大量元素和微量元素 。 大量元素：c、h、o、n、p、s、k、ca、na、mg等 ， 微量元素：mn、zn、cu、b、mo、fe等 。 碳源一般为蔗糖 。 维生素中只有硫胺素是必需的 ， 而烟酸、维生素b6和肌醇对生长之起促进作用 。 常用的生长调节剂有iaa（吲哚乙酸）、iba（吲哚-3-丁酸）、naa（萘乙酸）、noa（萘氧乙酸）、p-cpa（对氯苯氧乙酸）、2 ， 4-d（二氯苯氧乙酸）、2 ， 4 ， 5-t（三氯苯氧乙酸）；bap（苄氨基嘌呤）、6-ba（苄基腺嘌呤）、2-zi（异戊烯氨基嘌呤）、kt（激动素)等 。 有机附加物是指甘氨酸、水解酪蛋白、椰子乳等 ， 可促进分化 ， 但如培养基配方适当 ， 则大多数组织是不需要的 。

培养基的种类、成份直接影响到培养材料的生长发育 ， 故应根据培养植物的种类和部位 ， 选择适宜的培养基 。 培养基种类繁多 ， 最基本、最常用的培养基为ms培养基（见表1） 。

2.培养基的配制

①先按表1配制ms培养基贮液 ， ②再将贮液与其他成分按比例混合 。 ③此外还需加入适量的蔗糖作为碳源 ， 起支持作用的琼脂粉 ， 适量的生长调节剂等 。 ④将上述培养基加热溶解后 ， 加蒸馏水使培养基达到终体积 。 ⑤再用0.1mol/lnaoh或0.1mol/lhcl调节培养基的ph值至最适 。 ⑥分装至三角烧瓶 ， 封口膜封口 ， 等待灭菌后使用 。

3.几种诱导愈伤组织的培养基

胡萝卜ms+0.5mg/l6ba+0.5mg/lnaa

玫瑰叶盘 ， 芽ms+0.5mg/l6ba+0.5mg/lnaa

烟草叶盘、叶柄ms+0.1mg/l6ba+0.5mg/lnaa

ph5.8 ， 蔗糖30% ， 琼脂粉6.5g/l 。

（二）灭菌

1．培养基及器具灭菌

培养基、无菌水需要在高压灭菌锅中灭菌 。 灭菌作用取决于温度 ， 常用的灭菌温度为121℃ ， 所需时间应随要灭菌的液体的容积变化而变化（见表2）灭菌结束后待温度下降到50℃以下 ， 才能取出已灭菌的培养基 。

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